相关背景：

　　隐孢子虫(Cryptosporidium Tyzzer,1907)为体积微小的球虫类寄生虫。广泛存在多种脊椎动物体内，寄生于人和大多数哺乳动物的主要为微小隐孢子虫(C.parvum)，由微小隐孢子虫引起的疾病称隐孢子虫病(cryptosporidiosis)，是一种以腹泻为主要临床表现的人畜共患性原虫病，被世界卫生组织(WHO)列为世界六大腹泻病之一。自1976年在美国首次发现人体感染隐孢子虫病例以来，目前该病已遍及除南极洲外的90多个国家，300多个地区。发达国家隐孢子虫阳性率为0.6%～20%，发展中国家为4%～32%，我国于1987年在南京首次报道2例人体感染病例，此后陆续在江苏、安徽、山东、湖南、云南、黑龙江、河南、上海等省(直辖市、自治区)均有隐孢子虫感染的报道，感染率为1.33%～13.49%。

　　文章概述：

　　作为隐孢子虫病检测金标准的分子诊断技术PCR,只适合于实验室检测，需要昂贵的温度循环仪，而且商业化核酸提取试剂盒步骤多，操作繁琐，并不适用于现场快速检测工作的进行。基于此，建立一种操作简单，快速，高效的检测方法对于隐孢子虫属检测工作意义重大。有研究发现，通过加入0.1%十二烷基肌氨酸钠的沸水可以使隐孢子虫卵囊中DNA释放出来，称为LLS法。因此本文作者利用热水法(LLS)分离奶牛粪便中DNA，并且通过胶体金试纸条结合RPA技术(LF-RPA)快速检测临床样本中的隐孢子虫。

　　1 通过不同时间和孵育温度下LF-RPA扩增反应显示： LF-RPA扩增体系在不同温度(30-45℃)下，10min之内便能达到显著的检测效果。

　　2 通过多种寄生性原生虫属和阴性对照样本测试LF-RPA反应显示：LF-RPA反应引物和探针系统表现出高度特异性。

　　3 通过临床样本灵敏度试验显示，LF-RPA检测灵敏度能达到0.5 oocysts/reaction，远高于巢式PCR的10 oocysts/reaction，并且不受PCR抑制剂的影响。

　　值得注意的是，由于RPA反应的高灵敏性，容易发生交叉污染，所以实验操作过程中使用的手套，管子，枪头必须保证无菌，操作区在使用前必须进行紫外处理;另外长时间(30min)将LF试纸条检测留在PBST缓冲液中会产生假阳性，但通过将扩增子1:100稀释(而不是1:50稀释)将有效的解决这个问题。总而言之，本文建立一种高灵敏性和高特异性的，低成本的，快速检测粪便中隐孢子虫属的新方法，为预防和控制隐孢子虫病，开发临床诊断试剂盒提供一种新的思路。

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