mRNA疫苗体外合成解决方案

新冠mRNA疫苗制备流程：

1、mRNA体外转录  相关产品：T7 RNA Polymerase (货号：E121)

高度特异识别T7启动子

单次反应RNA产量可达100μg（模板仅需100ng）

可对低至1ng模板进行有效转录

Qubit数据显示，Novoprotein试剂盒20ul转录体系产物磁珠纯化后产量在100-150ug。

Qsep1结果显示，体外转录得到的RNA完整性很好。

2、mRNA转录后修饰：加帽加尾

2.1、mRNA加帽(Cap0)   相关产品：Vaccinia Capping system (货号：M062)        

高效完成mRNA加帽过程       

提高mRNA的稳定性，防止被RNA酶降解                                                           

提高mRNA的翻译效率

2.2、mRNA加帽(Cap1)  相关产品：mRNA 2’-O甲基转移酶 (货号：M072)

高效完成RNA 5´ 末端紧邻帽结构的第一个核苷酸的甲基化      

使带帽 Cap 0甲基化为 Cap 1

提高 RNA 的翻译效率

改善 mRNA 显微注射和转染后的表达

降低免疫原性

Cap1更不容易被机体免疫系统的RNA感受器识别，因此免疫刺激更低

2.3、mRNA加尾(PolyA)  相关产品： E. coli Poly(A) Polymerase (货号：M012)

稳定mRNA的存在形式

引导转录终止

提高RNA在真核细胞中的翻译效率

左边novoprotein，右边某品牌A

酶加量 1：0U；2：5U；3：1U；4：0.2U；5：0.04U；6：0.008U

3、其他辅助产品  

3.1、防止mRNA降解 相关产品：RNase抑制剂 (货号：E125)

与RNase  A形成1：1复合体，对RNase 表现高度的非竞争性抑制，保护mRNA转录后不被降解

65℃保温10min，40U酶活可保留一半以上，冻融10次酶活基本不受影响

3.2、降解模板DNA  相关产品：DNase I (货号：E127)

可以将单链或双链DNA同等程度进行随机分解，生成具有5'-P末端寡核苷酸的脱氧核糖核酸。

mRNA转录结束后，消化模板DNA

同对照相比均能很好的去除RNA样本中DNA残留

3.3、增加mRNA产量  相关产品：无机焦磷酸酶 (货号：M036)

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