目录号：N259-YH01-01B

产品描述:

Cleavage Under Target & Tagmentation (CUT&Tag)是一种新兴的DNA-蛋白质互作研究方法。CUT&Tag以融合了protein A/G的Tn5转座酶为核心，融合蛋白通过protein A/G与抗体结合，使得Tn5被栓系在靶位点周围，从而在目的位点附近进行酶切反应，并同时引入二代测序所必需的接头序列，产物DNA经过后续提取与PCR扩增后，得到直接用于测序的文库。CUT&Tag与传统的ChIP-Seq技术相比较，实验不需要超声打断，也不需要传统的连接法添加测序接头，操作简单、周期短、信噪比高、重复性好、细胞用量少，为极低起始细胞量和单细胞测序研究提供了可能性。

NovoNGS® CUT&Tag 3.0 High-Sensitivity Kit (for Illumina®) 试剂盒包含CUT&Tag实验中孵育抗体、转座体、构建文库的相关试剂，可以用于组蛋白修饰和转录因子的染色质结合状态研究。本试剂盒包含高活性的ChiTagTM  pAG-Tn5，相较于最初版本的pA-Tn5转座酶，pAG结构域对兔、鼠等多种来源抗体具有广谱的强亲和性，在实验抗体的选择上具有更大的空间。

针对CUT&Tag打断产物DNA提取过程中小片段丢失的问题，本试剂盒提供优化的Tagment DNA Extract Beads，相较于常规的片段分选磁珠可以完整的回收CUT&Tag产物中的小片段DNA，大大简化了酚氯仿-乙醇沉淀法的繁琐操作。此外，本试剂盒还提供了阳性抗体H3K4me3（兔抗）以及相应的二抗（羊抗兔IgG），用于阳性对照实验（仅B包装提供阳性抗体）。

产品用途：

DNA-蛋白质互作研究。在常见的哺乳动物细胞上用于替代传统的ChIP-Seq 技术，特别适用于细胞数量较少的样本，也可应用于经过处理的植物和酵母样本上。 

基本原理：细胞被固定在刀豆蛋白磁珠（ConA磁珠）表面，然后加入洋地黄皂苷（digitonin）透化细胞膜，依次进行一抗、二抗、转座体的孵育，随后加入Mg2+激活转座酶进行片段化反应，反应产物经过DNA提取、PCR富集完成二代测序文库的构建。对于人源细胞常规的组蛋白修饰，仅需进行3-5M reads的测序量就能得到高分辨率的全基因组图谱。

产品性能和应用实例：

■ ChiTagTM  pAG-Tn5的酶切活性：

■ 不同细胞数量样本上的CUT&Tag结果：

■ 不同抗体的CUT&Tag结果：

■ 不同细胞系的CUT&Tag结果：

转座体单链接头序列：

Adaptor1: 5’-TCGTCGGCAGCGTCAGATGTGTATAAGAGACAG-3’

Adaptor2: 5’-GTCTCGTGGGCTCGGAGATGTGTATAAGAGACAG -3’

ME: 5’-pCTGTCTCTTATACACATCT-NH2-3’

转座体单链接头序列：

5’-AATGATACGGCGACCACCGAGATCTACAC-Index2(i5)-TCGTCGGCAGCGTCAGATGTGTATAAGAGACAG-xxxxxxxxx-CTGTCTCTTATACACATCTCCGAGCCCACGAGAC-Index1(i7)-ATCTCGTATGCCGTCTTCTGCTTG-3’，其中-xxxxxxxxx-为插入序列,两端为文库结构。

参考文献：

N6-methyladenosine modification of MALAT1 promotes metastasis via reshaping nuclear speckles[J]. Xinyu Wang et al. Developmental Cell. 2021.

The chromatin accessibility landscape reveals distinct transcriptional regulation in the induction of human primordial germ cell-like cells from pluripotent stem cells[J]. Xiaoman Wang et al. Stem Cell Reports. 2021.

Cellular senescence in hepatocellular carcinoma induced by a long non-coding RNA-encoded peptide PINT87aa by blocking FOXM1-mediated PHB2[J]. Xiaohong Xiang et al. Theranostics. 2021.

Gastrin, via Activation of PPARα, Protects the Kidney Against Hypertensive Injury[J]. Daqian Gu et al. Clinical Science. 2021.

Alpha‐fetoprotein accelerates the progression of hepatocellular carcinoma by promoting Bcl‐2 gene expression through an RA‐RAR signalling pathway[J]. Chao Zhang et al. Journal of Cellular and Molecular Medicine. 2020.

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