重组酶聚合酶扩增(RPA)–核酸扩增的另一种选择-默瑞新闻-TwistDx,KAPA,Echelon,默瑞生物,Jackson抗体,Biotechrabbit酶,Enzymatics,二代测序酶,ChromoTek,透析袋

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重组酶聚合酶扩增(RPA)–核酸扩增的另一种选择
作者:Morey 发布时间:2018-12-11 点击次数:4926

TwistDx 的重组酶聚合酶扩增 (RPA) 将彻底改变在资源有限的现场环境中扩增和检测核酸的能力。

公司背景

  TwistDx Inc. 由分子生物学家兼蛋白生物化学家 Niall Armes 博士以及 Derek Stemple 博士和 Nagesh Mahanthappa 博士于 1999 年共同创立,其总部位于美国马萨诸塞州剑桥市。TwistDx Limited 于 2002 年成立,其公司位于英国剑桥,2010年被IVD行业POCT巨头美艾利尔Alere收购,Alere在2017年4月被雅培Abbott收购。

RPA技术原理


  RPA 体系的重点是重组酶,这些酶与寡核苷酸引物形成复合体,并使引物与双链 DNA 中的同源序列配对。单链 DNA 结合 (SSB) 蛋白与被取代的 DNA 链结合,并使形成的 D 环保持稳定。然后从引物启动由聚合酶介导的 DNA 扩增,但前提是存在靶标序列。一旦启动,扩增反应将快速进行,因此开始时只需一点靶标DNA 拷贝数,高特异性 DNA 扩增在数分钟内即可达到可检出水平。

RPA循环


  RPA 的技术特点

  为什么选择RPA方法?

  速度

  RPA 非常快速,在 37-42°C 这一通常最适宜的反应温度下,只需少量核酸分子即可在 3-10 分钟(通常)内扩增至可检出水平,但这将取决于靶标大小。在大部分情况下,只需要一个人即可在半小时内采集样本、制备样本、运行检测并取得结果,并且无需专业培训。

  灵敏度

  RPA 可检测复合样本中的单拷贝 DNA 和10拷贝甚至更少 RNA,而无需预先纯化核酸。

  特异性

  RPA 具有高度特异性,该技术可从可能含有数百纳克来自多个不同物种的不相关复合基因组 DNA(包括人 DNA)的样本中识别并扩增单个 DNA 分子,抗干扰能力强。

  恒温运行

  RPA 在恒定的低温(37-42°C 最适宜)下运行。对于某些应用,如果需要,即便体温也可支持 RPA 扩增。该反应在偏离温度及低温设置下也表现稳健,即使在常规室温 25°C 下也将奏效,虽然反应速度会下降;在此温度下,只要此生物化学过程被正确配置,仍可在一小时内获得结果。

  样本容差

  RPA 对样本类型的要求宽松,有时可直接检测未经核酸纯化的原始样本,例如血液、鼻拭子或培养基。通常,只需采用基本的病原体裂解方法处理样本以释放核酸即可,例如热处理或弱碱处理。每种检测所需的最合适的样本制备方法取决于病原体滴定度、是否存在抑制剂以及裂解要求等因素,并将需要设计到检测程序中。RPA 对某些复合样本类型的宽容性使该技术在原则上非常适合广泛的现场和床边应用。

  广泛的适用性

  RPA 能够方便地应用于任何 DNA 或 RNA 靶标,无序列偏好性,这一点对于NGS尤其重要。如果将逆转录酶添加到反应混合液中开发出了超高灵敏度的 RNA 一步检测法。

  多重检测

  通过将多种引物同时添加到同一反应管中,单次 RPA 测试即可扩增和检测多种不同的靶标。

  低设备成本

  RPA 仅需要基本的检测设备,也就是说,最终用户可以使用我们的产品开发出适合各种应用和环境的人性化诊断方法和试剂盒。

  灵活的试剂形态

  核心反应组分能够以稳定的干燥形态供货,该形态易于运输,且无需冷藏即可储存最多 12 个月(稳定性可能因用途不同而有变化,因此仍建议在冷藏条件下长期储存),也能够以 PCR 试剂更常见的液体形态供货,该形态允许用户针对特定的应用改变反应体积和组分比例。

  多种检测形式

  RPA 可应用于各种检测系统和仪器,包括实时荧光探针和夹心法等形式。

RPA 与 其他核酸扩增方法PCR及LAMP的比较



设备和配件

 

T16-ISO Instrument

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T16-ISO 是一款在适宜的恒定温度下可进行下一代诊断性 DNA/RNA 扩增的高级恒温仪器,这一紧凑、低成本、独立、灵敏的仪器适合实地和床边诊断应用。

Product: T16Device

Features

最多容纳 2 排(每排 8 支)标准 0.2 mL PCR 试管

每个试管三通道荧光检测*

对 RPA 反应进行磁力混合(需要在 RPA 反应混合物中加入微珠)

仪器可配置为独立运作或连接 PC 模式

便于使用高级桌面软件进行研究应用

触摸屏 LCD,图形用户界面可实现高级工作流程管理

可互换的模块化光度头,可配置为多通道

试验温度范围为 37˚C 到 65˚C

体积小巧,适合台式和实地应用

USB 和以太网连接可提供数据数据传输和 LIS 集成

灵活的试验曲线创建和高级数据显示与导出

随附携带箱和软件

 

T8-ISO Instrument

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高级 T8-ISO 仪器是一款紧凑、独立、高灵敏度的下一代分子检验仪器,适合实验室和实地应用。T8-ISO 仪器是一款可测量两种荧光团的便携式仪器:FAM™ 和 ROX™ 或其他具有相似光谱的荧光团。
本仪器仅适合作研发之用,未针对特定检测方法和应用进行进一步测试和认证,不适合作体外医疗诊断 (IVD) 之用。

Features

体积小巧,适合台式和实地应用

可容纳 8 个标准的 0.2 ml 试管

支持重组酶聚合酶扩增 (RPA)

对 RPA 反应进行磁力混合(需要在 RPA 反应混合物中加入微珠)

每个试管双通道荧光检测

便于使用高级桌面软件进行检测配置管理和导出

大尺寸 4.3 英寸触摸屏 LCD,可供查看单个图形

图形用户界面可实现高级工作流程管理

试验温度范围为 37˚C 到 65˚C

USB 和以太网连接可提供数据数据传输和 LIS 集成选项

提供选配的外置电池 - 订单

提供选配的携带箱 - 订单

 

PCRD Nucleic Acid Detection(50 件/包)

被称为 PCRD 的核酸侧向层析免疫检测 (NALFIA) 可用于取代 DNA 琼脂糖胶电泳。PCRD 只需 10 分钟即可检出成功扩增的靶标 DNA 序列,是希望快速获取结果的繁忙实验室的理想之选。
PCRD 是替代琼脂糖胶电泳的快速、安全且经济实惠的检测方法,可与重组酶聚合酶扩增 (RPA) 结合使用。

Product code: PCRD3Kit

Features

两条检测线(外加质控线)可实现多个分析物的检测

与 TwistAmp® nfo 试剂盒完全兼容

绝佳的信噪比

容易使用

在 10 分钟内给出结果

无需扩增后纯化或杂交

 

U-Star Disposable Nucleic Acid Detection Device

一次性核酸检测设备随附抗体夹心法免疫层析试纸条。检测在密封盒内进行,以防扩增产物交叉污染。只需 1-2 分钟的准备,将试管放入盒内之后 10-15 分钟内出结果。相比传统的电泳,本产品是一种快速、防交叉污染、无毒性且免仪器的核酸扩增产物检视方法。

Features

每包 20 套

非常容易使用

无需使用仪器

在盒内密封反应管后 15 分钟内出结果

包含扩增子容器,非常适合实地使用

可根据要求单套销售。


Milenia Genline HybriDetect 1 (100 件/包)

Milenia Genline HybriDetect 1 横向流动试纸条可用于检测在 TwistAmp® nfo 试剂盒与 TwistAmp® nfo 探针及带标记扩增引物结合使用下生成的扩增产物。Milenia Genline HybriDetect 1 横向流动试纸条可以检测带生物素标记的扩增子。扩增后,可将产物稀释、涂点到试纸条样本垫并在缓冲液中运行数分钟,随后如果检测线上有金离子聚集则表明存在特异性扩增子。虽然最初是为 PCR 应用而开发,本产品在与 RPA 系统结合使用时无需扩增后纯化或杂交即可得出极佳的结果。横向流动试纸条能够以便利的免仪器方式进行检测,在某些环境中可能是一个不错的选择。
Product code: MILENIA01

Features

每盒包含 100 个专门为 RPA 客户生产的试纸条

无需扩增后纯化或杂交

无需使用仪器

一条检测线(外加质控线)可实现单个分析物的检测

与 TwistAmp® nfo 试剂盒完全兼容

默瑞生物

       默瑞(上海)生物科技有限公司是Chromotek品牌的中国总代理。默瑞拥有两个产品部,仪器部和试剂部。

  仪器部主要产品有:Leica显微系统,Merk Millipore实验室纯水超纯水仪及配套耗材,Tecan酶标仪、液体工作站,Roche实时定量PCR仪、DNA测序仪、核酸纯化,Partec流式细胞仪,IKA桌面小仪器,Miele清洗机,UniEquip冻干机和层析冷柜等。

  试剂部主要产品有: TwistDx恒温扩增试剂盒,Echelon酯类研究试剂,Jackson ImmunoResearch抗体,MTI-GlobalStem细胞转染试剂,ChromoTek标签抗体, Horizon Discovery测序标准品和细胞,Enzymatics二代测序酶, BiosPacific抗体抗原,bioWORLD植物生长剂,Nanocs PEG修饰剂,Spectrumlabs透析袋,Brighter Ideas荧光蛋白,Lumiprobe荧光染料,Polysciences微球,Emfret心血管疾病研究抗体, Iduron糖胺聚糖产品,JenaBioscience分子试剂,eENZYME病毒研究工具等。

免费热线电话:4006-400-850

Sales QQ:2885337893


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